摘要：
摘 要 目的：利用合成的podocin多肽制备针对斑马鱼podocin的多克隆抗体，鉴定其特异性，并应用于斑马鱼足细胞损伤研究中。方法：（1）设计、合成斑马鱼podocin抗原多肽，将合成后的多肽与钥孔血蓝蛋白（KLH）偶联，免疫新西兰大白兔制备抗血清，Protein A亲和纯化得到抗podocin多克隆抗体；(2)ELISA和免疫组化检测抗体效价及组织特异性；（3）构建足细胞特异性表达硝基还原酶（NTR）的转基因斑马鱼Tg(pod:Gal4;UAS:NTR-mCherry)，NTR/MTZ(甲硝唑)系统特异性地诱导足细胞损伤；用podocin反义寡核苷酸阻断正常斑马鱼胚胎podocin mRNA的翻译过程，利用抗podocin抗体对上述两种疾病模型进行免疫荧光染色以验证合成的podocin抗体能否应用于斑马鱼足细胞研究中。结果：（1）化学合成的多肽纯度为92.6%，达到免疫用抗原标准；（2）ELISA和免疫组化染色示结果表明抗体效价分别达1：5.12×105和 1：106；（3）免疫荧光染色表明无论在斑马鱼前肾还是中肾，podocin均特异性地表达于足细胞，且沿着毛细血管袢呈连续、线性分布，表明抗体具有良好的组织特异性；（4）MTZ诱导足细胞损伤24h后见podocin呈粗糙的颗粒状分布，48h后阳性表达面积占整个肾小球面积比值明显下降；（5）显微注射podocin反义寡核苷酸的斑马鱼胚胎出现心包水肿、体轴弯曲的表型，第3天时几乎无Podocin表达，随后逐渐恢复至正常，至第5天时表达与正常组无异。结论：所制备的斑马鱼抗podocin抗体效价高、组织特异性强，能够反应足细胞损伤情况，为斑马鱼足细胞研究提供了有力的工具。
