肾脏病与透析肾移植杂志 ›› 2019, Vol. 28 ›› Issue (2): 139-144.DOI: 10.3969/j.issn.1006-298X.2019.02.008
摘要：
目的：探讨达拉菲尼对小鼠肾脏缺血再灌注损伤（IRI）的保护作用及机制。
方法：将24只C57BL/6小鼠随机分为4组：假手术组（sham组）；缺血再灌注组（IRI组），夹闭双侧肾蒂30 min再灌注24h；达拉菲尼组（DAB组），仅与IRI组在相同时间灌胃给予相同量的达拉菲尼；达拉菲尼预处理+缺血再灌注组（DAB+IRI组），灌胃给予达拉菲尼2h后进行IRI造模，每组6只。收集小鼠IRI 24h后的血清及肾脏组织。采用相应试剂盒检测各组肾功能血清肌酐(SCr)和血尿素氮（BUN）水平，HE及PAS染色比较各组肾脏病理学改变，Western Blot及qRTPCR检测肾小管损伤标志物中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤分子1（KIM1）的蛋白及mRNA水平，qRTPCR检测炎症因子白细胞介素6（IL6）和肿瘤坏死因子α（TNFα）的mRNA水平，免疫组织化学染色检测肾脏组织中TNFα蛋白表达，末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测肾组织细胞死亡情况，Western Blot检测肾脏组织中程序性坏死（necroptosis）通路相关的受体相互作用蛋白1（RIP1）、受体相互作用蛋白3（RIP3）、磷酸化的受体相互作用蛋白3(pRIP3)、混合系列蛋白激酶复合物（MLKL）、磷酸化的混合系列蛋白激酶复合物（pMLKL）蛋白水平。
结果：与sham组相比，IRI组SCr、BUN水平升高（P<005）,肾组织病理损伤严重，小管损伤标志物NGAL和KIM1蛋白和mRNA水平升高，炎症因子IL6以及TNFα mRNA含量增加，肾脏组织TNFα蛋白表达升高，肾脏组织细胞死亡增多，RIP1、RIP3、pRIP3、MLKL以及pMLKL蛋白表达增加；与IRI组比较，DAB+IRI组减轻肾功能、肾组织损伤，减少NGAL、KIM1的蛋白和mRNA表达水平，下调IL6和TNFαmRNA水平，减少肾脏组织中TNFα蛋白表达，抑制RIP3、pRIP3及pMLKL的蛋白表达（P均<005）,而RIP1和 MLKL蛋白改变不明显。DAB组与sham组间各指标无统计学差异。
结论：达拉菲尼通过抑制RIP3介导的程序性坏死从而对小鼠肾脏缺血再灌注损伤起保护作用。
