摘要:
【摘要】 目的 探讨前列腺素E2受体1亚型(EP1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的小鼠肾小球系膜细胞(MCs)增殖、细胞外基质的影响及可能机制。方法 体外原代培养MCs。采用脂质体LipofectamineTM 2000化学合成法将siRNA转染至MCs中沉默EP1受体,筛选干扰效率最大的EP1-siRNA片段。实验分组:1:正常对照组;2:TGF-β1(10 ng / ml)组;3:NC-siRNA+ TGF-β1(10 ng / ml)组;4:EP1-siRNA+ TGF-β1(10 ng / ml)组;5:EP1-siRNA组。ELISA法检测各组细胞上清中PGE2的表达,Real-Time PCR方法检测各组细胞纤维连接蛋白(FN)、结缔组织生长因子(CTGF)、环氧化酶2(COX2)、膜结合型前列腺素E2合酶1(mPGES-1 )mRNA的表达。Western blot法检测FN、CTGF、COX2、mPGES-1蛋白及p38MAPK、ERK活性的变化。结果 与正常对照组相比, TGF-β1组FN、CTGF、COX-2、mPGES-1的mRNA和蛋白的表达上调(P<0.05);与TGF-β组相比, EP1-siRNA+ TGF-β1组FN、CTGF、COX-2、mPGES-1的mRNA和蛋白的表达下调(P<0.05);TGF-β1刺激后,p38MAPK、ERK磷酸化水平明显增强(P<0.05),EP1-siRNA+ TGF-β1组, p38MAPK、ERK磷酸化水平较对照组明显下调(P<0.05)。 结论 EP1-siRNA可能通过抑制ERK和p38MAPK磷酸化减轻TGF-β1 诱导的小鼠系膜细胞损伤。