摘要：
摘 要 目的：阐明Smad锚着蛋白（Smad anchor for receptor activation, SARA）在高葡萄糖诱导的HK-2细胞ECM沉积中的作用及分子机制，探讨以SARA为靶点抑制高葡萄糖诱导的HK-2细胞ECM沉积的策略。 方法：用高浓度葡萄糖（30mM D-葡萄糖）刺激HK-2细胞，通过Western blot及Realtime PCR检测纤维连接蛋白（Fibronectin, FN）和Ⅰ型胶原（CollagenⅠ, ColⅠ），进而检测TGF-β1、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3的表达变化，通过细胞免疫荧光、WB、Realtime PCR 检测SARA的表达变化；分别转染全长SARA质粒（SARA(WT)）及敲除SBD结构域的SARA质粒（SARA(dSBD)），检测转染后高糖诱导HK-2细胞FN及ColⅠ表达的变化。 结果：Western Blot及Realtime PCR结果显示，30mM D-葡萄糖刺激后HK-2细胞FN和ColⅠ蛋白及mRNA表达呈时间依赖性升高。高糖可诱导TGF-β1、Smad3蛋白及其mRNA表达呈时间依赖性上调；Smad2 mRNA表达呈时间依赖性上调，而其蛋白表达呈时间依赖性下调；高糖可促进Smad2和Smad3磷酸化，但Smad3的活化时间更长。而SARA的蛋白及mRNA表达呈时间依赖性降低，细胞免疫荧光结果亦证实高糖刺激后SARA表达下降。与高糖组相比，转染SARA(WT)可使HK-2细胞FN和ColⅠ表达下调；转染SARA(dSBD)对高糖诱导的HK-2细胞FN和ColⅠ表达无明显影响。 结论：高糖诱导的HK-2细胞ECM沉积过程中，TGF-β1信号通路活化，SARA的表达下调；过表达SARA可能通过上调Smad2的蛋白表达，抑制TGF-β信号传导，从而减少高糖诱导的HK-2细胞ECM分泌。
