肾脏病与透析肾移植杂志 ›› 2018, Vol. 27 ›› Issue (3): 240-244.DOI: 10.3969/j.issn.1006-298X.2018.03.008
摘要:
目的:探讨二氢硫辛酸琥珀酰转移酶(DLST)在小鼠肾间质纤维化中的作用。
方法:采用结扎小鼠单侧输尿管建立单侧输尿管梗阻(UUO)模型和HK2细胞缺氧模型,60只C57b/l小鼠随机分为假手术组(Sham,n=15)和UUO模型组(n=45),UUO模型组又随机分为1周(n=15)、2周(n=15)和3周组(n=15);HK2细胞实验分为对照组、缺氧组、缺氧加DLST高表达组和DLST干扰组。HE和Masson染色观察各组小鼠肾脏病理性变化,免疫组化观察在体实验不同时间点DLST的表达,Westernblot检测DLST、I型胶原蛋白(ColⅠ)和αSMA的蛋白变化,细胞实验中采用质粒高表达和shRNA干扰DLST。
结果:HE和Masson染色显示,与Sham组相比,UUO模型小鼠均出现肾小管损伤,肾小管上皮细胞变性,肾间质有大量炎性细胞浸润,损伤程度逐渐加重。Western Blot结果表明,与Sham组相比,UUO模型小鼠肾脏ColⅠ和αSMA的表达显著增加(P<005),而DLST的表达明显减少(P<005),均呈现时间依赖性。免疫组化结果表明,与Sham组相比,UUO组DLST的表达逐渐减少。细胞实验结果显示,正常条件下干扰DLST后,纤维化蛋白ColⅠ表达明显增加(P<001),而缺氧条件下,高表达DLST后可明显减少ColⅠ蛋白的表达(P<001)。
结论:小鼠肾脏DLST蛋白表达的减少是导致肾间质纤维化的重要原因,可能通过引起能量代谢障碍参与肾间质纤维化的发生过程。